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固相萃取的十个技巧

更新时间:2024-04-11浏览:193次

固相萃取的十个技巧

1. 了解您的化合物!

被分析化合物的性质会对哪种类型的SPE产生强烈反应。查看我们SPE 指南。 其中两个最重要的值是目标分析物的 pKa Log P

pKa = 分析物半电离和半非电离的点。

Log P = 化合物疏水性的量度。

2. 优化负载pH

pH值对任何SPE方法都有很大影响,可用于优化SPE产品上化合物的保留。

例如,反相法调节pH值以中和分析物上的任何电荷。这将使它们更具疏水性,更好地改善与树脂的相互作用。对于酸性化合物,将 pH 值调整为 2 个低于 pKa pH 单位,对于碱性化合物,将 pH 值调整为 2 个高于 pKa pH 值。

3. 提高洗涤和洗脱强度

    使用混合模式或反相 SPE 产品时,可以调整洗涤和洗脱强度以获得干净的提取物。Log P 是一个很好的属性,可以帮助决定设置这些内容。

高对数 P - 在洗涤步骤中使用更强的有机强度。

低对数P - 降低洗脱溶剂的有机强度,以抑制疏水干扰,同时仍能洗脱所选的分析物。

4.使用新鲜标样!

一些分析物容易受到热和光的降解,长时间储存时会从溶液中析出。这将影响校准标准和

运行的恢复值。在开始之前,先用新鲜标样开始您的程序。

5. 了解您的吸附剂!

找出您正在使用的吸附剂的 pKa 并将其与您的分析物 pKa 一起使用,以在负载和洗涤步骤中调节溶液的 pH 值,而无需去离子化合物和树脂(仅限弱离子树脂)。

6. 吸附剂调理

现在您已经知道了吸附剂的pKa(步骤5),您的吸附剂床就可以被激活,并准备通过调节结合分析物。在大多数二氧化硅基SPE吸附剂中,二氧化硅与通常平放在颗粒表面的功能化部分键合。

调节步骤(使用水溶性有机溶剂,例如MeOH)使这些键合官能团“站立"在颗粒顶部,为目标分析物提供最大的表面积来相互作用/结合。如果吸附剂是可水润湿的,则可能不需要此步骤,但它可以通过对吸附剂床进行溶剂清洗来提高提取物的清洁度。

7. 流速很重要

流速对于成功的反相SPE工作流程非常重要。保留机制在很大程度上依赖于吸附剂和目标分析物之间的范德华相互作用力。SPE过程中的快速流速会降低目标分析物与吸附剂介质正确结合的能力,并可能导致SPE方法的上样和洗涤步骤出现突破。缓慢而稳定的样品流赢得了比赛。以流速为目标,小于或等于每秒 1 滴(~ 1 毫升/分钟)。

8. 松散包装与复合包装

松散堆积的材料会给吸附剂床带来许多问题,包括窜道、压缩、排空以及由于松散填充后顶部熔块缺乏压缩而导致的床重量与床高比差异不一致(图 1)。所有这些因素都会对测试的回收率和可重复性产生负面影响。考虑像Microlute® CP系列这样的复合产品,这些产品旨在消除这些问题,提高SPE方法的回收率和重复性。

                                             


9. 洗脱前干燥SPE树脂

二氧化硅在干燥时非常容易发生固相塌陷。在完成SPE程序的最后清洗步骤之前,任何时候都不要让二氧化硅基树脂变干 - 在加载步骤中尤其如此。这通过限制分析物和键合相之间可能的相互作用来防止回收率降低。

以下小贴士适用于聚合物树脂和二氧化硅树脂:

• 执行洗涤步骤后,确保使用真空或正压干燥树脂,直到树脂干燥(我们建议施加正压/真空至少 3 分钟)或直到看不到洗涤溶剂。

• 如果您的方法需要干燥和复溶步骤,则干燥树脂减少干燥时间,大多数洗涤溶剂中都存在水,这比大多数有机溶剂更难蒸发。

• 如果您的方法不需要干燥步骤,则在洗涤步骤后不干燥 SPE 树脂会导致注射液的最终溶液浓度降低,从而导致灵敏度降低。

10. 最佳干燥

确保您的干燥方法足够剧烈,以明显扰乱洗脱溶剂的表面,但又不能太剧烈,以免导致溶液从孔中排出的可能性,因为这将导致严重的RSD%和回收率差异。这可能非常困难,因为溶剂水平在干燥过程中会发生变化。

为了克服这个问题,请使用可编程或自动调节的蒸发器以实现高效的溶剂蒸发,例如Porvair Sciences Ultravap®系列蒸发器,该蒸发器可以在过程的所有阶段优化干燥,而不会产生任何样品污染的风险。

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